ZAŁĄCZNIK I

UWIERZYTELNIANIE METODY

1. WPROWADZENIE

A. Co celów wykonania art. 5 ust. 3 lit. i) oraz art. 17 ust. 3 lit. i) rozporządzenia (WE) nr 1829/2003, niniejszy Załącznik przewiduje przepisy techniczne dotyczące rodzaju informacji w sprawie metod wykrywania, które dostarcza wnioskodawca, a także wymaganych do zweryfikowania warunków wstępnych dotyczących zdatności metody. Dotyczy to informacji na temat metody, jako takiej oraz testowania metody, przeprowadzanego przez wnioskodawcę. Wszystkie dokumenty zawierające wytyczne, określone w niniejszym Załączniku, lub przygotowane przez laboratorium odniesienia Wspólnoty (LOW) udostępnia LOW.

B. Kryteria zatwierdzania metody, oraz wymogi działania metody ustaliła Europejska Sieć Laboratoriów OGZ (EŚLG) w dokumencie zatytułowanym „Definicja minimalnych wymogów działania dotyczących analitycznych metod testowania OGZ” udostępnianym przez LOW. „Kryteria zatwierdzania metody” to kryteria, które należy spełnić zanim LOW wprowadzi jakąkolwiek metodę uwierzytelniania. „Wymogi działania metody” określają minimalne kryteria działania, które zgodnie z przyjętymi na szczeblu międzynarodowym przepisami technicznymi, metoda powinna spełniać po przeprowadzeniu przez LOW badania uwierzytelniającego, przeprowadzanego w celu potwierdzenia, że uwierzytelniona metoda nadaje się do celu wprowadzenia w życie rozporządzenia (WE) nr 1829/2003.

C. LOW, ustanowione na podstawie rozporządzenia (WE) nr 1829/2003 i wspomagane przez EŚLG, ocenia dostarczone informacje pod względem ich kompletności i zdatności do celu. W tym przypadku, uwzględniane są kryteria zatwierdzania metody zalecane przez EŚLG, opisane w części 1 (B).

D. Jeżeli dostarczone informacje na temat metody uznaje się za właściwe i spełniające kryteria zatwierdzania metody, LOW przystępuje do procesu uwierzytelniania metody.

E. Proces uwierzytelniania przeprowadza LOW zgodnie z przyjętymi na szczeblu międzynarodowym przepisami technicznymi.

F. LOW, wraz z EŚLG, przekazuje dalsze informacje dotyczące procedur roboczych procesu uwierzytelniania i udostępnia dokumenty.

G. LOW, wspomagane przez EŚLG, dokonuje oceny wyników uzyskanych w toku badania uwierzytelniającego dotyczącego zdatności do celu. W tym przypadku, uwzględniane są wymogi działania metody opisane w części 1 (B).

2. INFORMACJE DOTYCZĄCE METODY

A. Zgodnie z art. 5 ust. 3 lit. i) oraz art. 17 ust. 3 lit. i) rozporządzenia (WE) nr 1829/2003, metoda odnosi się do wszystkich metodologicznych etapów niezbędnych do przeprowadzenia analizy odnośnego materiału,.

W odniesieniu do danego materiału, musi ona obejmować metody ekstrakcji DNA i następczej kwantyfikacji w układzie łańcuchowej reakcji polimerazy (PCR). W takim przypadku, metodę stanowi cały proces od ekstrakcji do techniki PCR (lub równorzędnej). Wnioskodawca przedstawia informacje na temat całej metody.

B. Jak opisano w dokumencie określonym w części 1 (B), EŚLG uznaje modułowość metody. Zgodnie z tą zasadą, jeśli jest to możliwe i właściwe, wnioskodawca może odnosić się do obowiązujących metod w odniesieniu do określonego(-ych) modułu(-ów). Może to być, na przykład metoda ekstrakcji DNA z określonej macierzy. W takim przypadku, wnioskodawca przedstawia dane doświadczalne z uwierzytelniania własnego, w którym w kontekście wniosku o zatwierdzenie, pomyślnie zastosowano moduł metody.

C. Wnioskodawca wykazuje, że metoda spełnia następujące wymogi.

1. Metoda jest specyficzna dla zdarzenia, a zatem musi działać wyłącznie w odniesieniu do OGZ, lub produktu opartego na MG i nie powinna działać w przypadku jej zastosowania do innego rodzaju, zatwierdzonych już zdarzeń; w przeciwnym przypadku, metody nie można stosować dla potrzeb jednoznacznego wykrywania / identyfikacji / kwantyfikacji. W przypadku roślin ZG, powyższe wykazuje się w oparciu o dobór niecelowych, zatwierdzonych zdarzeń transgenicznych i ich konwencjonalnych odpowiedników. Testowanie obejmuje zbliżone zdarzenia oraz, jeśli jest to właściwe, przypadki, w których w sposób wiarygodny przetestowano limity wykrywania. Tę samą zasadę specyficzności należy stosować do produktów, które składają się z, lub zawierają OGZ innego rodzaju, niż rośliny.

2. Metodę stosuje się do próbek żywności lub paszy, do kontroli próbek, oraz do materiału bazowego, który określono w art. 5 ust. 3 lit. j) oraz art. 17 ust. 3 lit. j) rozporządzenia (WE) nr 1829/2003.

3. Metodę opracowuje się, o ile jest to właściwe, uwzględniając następujące dokumenty:

- Ogólne wymogi i definicje: projekt normy europejskiej prEN ISO 24276:2002,

- Ekstrakcja kwasu nukleinowego: prEN ISO 21571:2002,

- Metody ilościowe oparte na kwasie nukleinowym: projekt normy europejskiej prEN ISO 21570:2002,

- Metody oparte na proteinach: zatwierdzona norma europejska EN ISO 21572:2002,

- Metody jakościowe oparte na kwasie nukleinowym: projekt normy europejskiej prEN ISO 21569:2002.

D. Do celów wykonania art. 5 ust. 3 lit. i) oraz art. 17 ust. 3 lit. i) rozporządzenia (WE) nr 1829/2003, wnioskodawca dostarcza:

a) w przypadku wniosku o zatwierdzenie obejmującego OGZ, produkty składające się z, lub zawierające OGZ, albo produkty wytworzone z OGZ, ilościową metodę wykrywania materiału GZ, specyficzną dla danego zdarzenia;

b) ponadto, w przypadku wniosku o zatwierdzenie obejmującego produkty wytworzone z OGZ, gdzie wykrywa się materiał genetycznie zmodyfikowany, ilościową metodę wykrywania w żywności lub paszy wytworzonej z OGZ, specyficzną dla danego zdarzenia.

E. Wnioskodawca przedstawia pełny i szczegółowy opis metody. W sposób niebudzący wątpliwości należy odnieść się do następujących zagadnień.

1. Podstawa naukowa: Należy przedstawić przegląd zasad, na jakich działa metoda takich, jak biologia molekularna oparta na DNA (np. dla PCR czasu rzeczywistego). Zaleca się dostarczyć odniesienia do właściwych publikacji naukowych.

2. Zakres metody. Wskazanie macierzy (np. przetworzona żywność, surowce), rodzaju próbek oraz zakres procentowy, w którym można stosować metodę.

3. Właściwości robocze metody. Należy w sposób niebudzący wątpliwości wskazać urządzenia wymagane do zastosowania metody, w odniesieniu do analizy per se, oraz przygotowania próbki. Należy także przedstawić dalsze informacje dotyczące wszelkich szczególnych aspektów o podstawowym znaczeniu dla stosowania metody.

4. Protokół. Wnioskodawca przedstawia pełny, zoptymalizowany protokół dotyczący metody. Protokół zawiera wszystkie szczegóły wymagane do przeniesienia i zastosowania metody w sposób niezależny w innych laboratoriach. Zaleca się korzystanie z szablonu protokołu, który można uzyskać od LOW. Protokół powinien zawierać szczegóły dotyczące:

- analizowanych materiałów,

- warunków pracy, instrukcji oraz reguł,

- wszelkich, niezbędnych materiałów, w tym szacunki ich ilości, a także instrukcje dotyczące przechowywania i obsługi,

- wszelkich, niezbędnych urządzeń, w tym nie tylko urządzeń podstawowych takich, jak układ PCR, czy wirówka, ale także małe elementy takie, jak mikropipety i rurki reakcyjne ze wskazaniem ich właściwych wymiarów, itp.,

- wszystkich etapów protokołu roboczego, opisanych w sposób niebudzący wątpliwości,

- instrukcji dotyczących zapisywania danych (np. ustawień lub parametrów uwzględnionych programów).

5. Model prognostyczny (lub podobny) niezbędny do zinterpretowania wyników i wyciągnięcia wniosków należy opisać w sposób możliwie najbardziej szczegółowy. Należy przedstawić instrukcje dotyczące właściwego zastosowania modelu.

3. INFORMACJE DOTYCZĄCE TESTOWANIA METODY PRZEPROWADZANEGO PRZEZ WNIOSKODAWCĘ

A. Wnioskodawca przedstawia wszystkie dostępne i właściwe dane dotyczące optymalizacji, oraz przeprowadzonego testowania metody. Jeśli jest to właściwe i możliwe, dane te i wyniki należy przedłożyć z wykorzystaniem parametrów działania zalecanych przez EŚLG i określonych w części 1 (B). Należy przedstawić opis przeprowadzonego testowania i podstawowych wyników, a także dane obejmujące wartości oddalone. LOW, wraz z EŚLG, przekazują dalsze przepisy techniczne dotyczące właściwych formatów tych danych.

B. Przedstawione informacje wykazują zdatność metody do celów wymiany informacji w ramach laboratorium. Oznacza to, że metoda powinna zostać przetestowana przez przynajmniej jedno laboratorium, niezależne od laboratorium, które opracowało metodę. Jest to istotny warunek wstępny dla pomyślnego przebiegu uwierzytelniania metody.

C. Informacje wymagane w zakresie opracowywania i optymalizacji metody:

1. podstawowe, przetestowane pary (w przypadku testu opartego na PCR): należy podać uzasadnienie, w jaki sposób i dlaczego wybrano sugerowaną parę;

2. testowanie stabilności: należy przedstawić wyniki doświadczalne z testowania metody za pomocą innych odmian;

3. specyficzność: wnioskodawca przedkłada pełną sekwencję wprowadzania wraz z bazowymi parami sekwencji pobocznej koniecznej do ustanowienia metody wykrywania specyficznej dla danego zdarzenia. LOW wprowadza te dane do bazy danych molekularnych. Zatem, przeprowadzając badania homologiczności, LOW jest w stanie ocenić specyficzność proponowanej metody.

D. Sprawozdanie z testowania. Oprócz wartości uzyskanych z indeksu działania, o ile jest to właściwe, należy przedstawić następujące informacje odnoszące się do testowania:

- laboratoria uczestniczące, czas analizy oraz schemat projektu doświadczalnego, w tym szczegóły dotyczące liczby prób, próbek, replik, itp.,

- opis próbek laboratoryjnych (np. wielkość, jakość, datę pobrania), dodatnie i ujemne kontrole, a także materiał bazowy, zastosowane plazmidy i tym podobne,

- opis podejścia zastosowanego do analizy wyników i wartości oddalonych testu,

- wszelkich obserwacji poczynionych podczas testowania,

- odniesień do właściwej literatury, lub przepisów technicznych wykorzystywanych podczas testowania.

4. PRÓBKI ŻYWNOŚCI I PASZY, ORAZ ICH PRÓBKI KONTROLNE

W świetle wykonywania art. 5 ust. 3 lit. j) oraz art. 17 ust. 3 lit. j) rozporządzenia (WE) nr 1829/2003, wraz z informacjami podanymi na podstawie sekcji 1, 2 i 3 niniejszego Załącznika, wnioskodawca przedstawia również próbki żywności i paszy, a także jej próbki kontrolne z rodzaju, oraz w ilości określanej przez LOW, a dotyczące danego wniosku o zatwierdzenie.

ZAŁĄCZNIK II

MATERIAŁ BAZOWY

Materiał bazowy określony w art. 5 ust. 3 lit. j) oraz art. 17 ust. 3 lit. j) rozporządzenia (WE) nr 1829/2003, wytwarza się zgodnie z przyjętymi na szczeblu międzynarodowym przepisami technicznymi takimi, jak Wytyczne ISO 30-34 (mówiąc bardziej szczegółowo, Wytyczna ISO 34, określająca ogólne wymogi dotyczące kompetencji producentów materiału bazowego). Materiał bazowy powinien być zatwierdzony, oraz we właściwym przypadku, zatwierdzenie powinno zostać wykonane zgodnie z Wytyczną ISO 35.

Do celów weryfikacji i oceny wartości, stosuje się metodę we właściwy sposób uwierzytelnioną (patrz ISO/IEC 17025:5.4.5). Niepewność należy ocenić zgodnie z GUM (Wytyczna ISO dotycząca Wyrażania Niepewności Pomiarowych: GUM). Poniżej podano główne właściwości tych przyjętych na szczeblu międzynarodowym, przepisów technicznych.

A. Terminologia:

Materiał bazowy (MB): materiał lub substancja, której jedna wartość, lub większa liczba wartości, jest w wystarczającym stopniu jednorodna i stabilna, by zastosować ją dla potrzeb kalibracji aparatury, oceny metody, lub przypisania wartości do materiałów;

Zatwierdzony materiał bazowy (ZMB): materiał bazowy, któremu towarzyszy certyfikat, z którego jedna, lub większa liczba wartości, została zatwierdzona na mocy procedury zapewniającej monitorowanie dokładnego urzeczywistnienia jednostki, w której wyrażono wartości oraz, w którym każdej, zatwierdzonej wartości towarzyszy niepewność o określonym poziomie pewności.

B. pojemniki ZG MB:

- pojemnik GM RM (butelki, fiolki, ampułki, itp.) muszą być zamknięte i zawierać nie mniej, niż ustaloną ilość materiału,

- próbki muszą wykazywać właściwą jednorodność i stabilność,

- należy zapewnić zamienność ZG MB,

- opakowanie musi być odpowiednie do przeznaczenia,

- oznakowanie musi być właściwe i dobrej jakości.

C. Testowanie jednorodności:

należy zbadać jednorodność zawartości butelek;

w ogólnej, szacowanej niepewności MB należy uwzględnić każdą możliwą niejednorodność stwierdzoną między butelkami. Wymóg ten ma zastosowanie nawet wtedy, gdy między butelkami nie występuje odchylenie istotne statystycznie. W takim przypadku, odchylenie metody, lub rzeczywiste, wyliczone odchylenie między butelkami (w zależności od tego, które z nich jest większe) należy włączyć w ogólną niepewność;

D. Testowanie stabilności:

stabilność należy wykazać za pomocą właściwej ekstrapolacji statystycznej dotyczącej dopuszczalnego okresu przechowywania ZG MB, mieszczącej się w granicach ustalonej niepewności; niepewność ta stanowi zazwyczaj część szacowanej niepewności MB;

przypisane wartości obowiązują wyłącznie w ograniczonym terminie i należy je poddawać monitorowaniu pod względem ich stabilności.

E. Charakteryzowanie partii:

metody zastosowane w celu weryfikacji i zatwierdzania należy:

- stosować w warunkach metrologicznie istotnych,

- uwierzytelnić przed zastosowaniem w sposób technicznie właściwy,

- stosować w oparciu o stopień dokładności i precyzji zgodny z docelowym progiem niepewności;

każdy zestaw pomiarów należy:

- monitorować względem ustalonych odniesień, oraz

- jeśli jest to możliwe, powinno mu towarzyszyć oświadczenie o stopniu niepewności;

laboratoria uczestniczące muszą:

- posiadać kompetencje wymagane do wykonania zadania,

- być w stanie uzyskać poziom monitorowania względem wymaganych, ustalonych odniesień,

- być w stanie oszacować niepewność pomiarową,

- wprowadzić odpowiedni i właściwy system oceny jakości.

F. Przechowywanie końcowe:

- aby uniknąć późniejszej degradacji, przed rozpoczęciem pomiarów wszystkie próbki przechowuje się w warunkach przeznaczonych do przechowywania końcowego ZG MB,

- w przeciwnym razie, należy je przewozić doraźnie, utrzymując w warunkach przechowywania, dla których wykazano, iż nie mają one wpływu na przypisane wartości.

G. Ustanowienie certyfikatu dla ZMB:

- należy ustanowić certyfikat uzupełniony sprawozdaniem z zatwierdzenia, zawierający wszelkie istotne i wymagane przez użytkownika informacje. Certyfikat i sprawozdanie należy udostępnić z chwila dystrybuowania ZG ZMB,

- zatwierdzone wartości muszą umożliwiać ich monitorowanie względem ustalonych odniesień i musi im towarzyszyć oświadczenie o niepewności ważne dla całego okresu składowania ZG ZMB.